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實驗中elisa試劑盒的基本準備工作

發布時間:2020-01-09瀏覽次數:1533返回列表

在常見的實驗中,elisa試劑的測定過程為試劑準備工作,加樣,洗滌,保溫等正常的實驗流程,一次好的準備工作可以使測定中試劑發揮zui大的作用,也可以因為一個小步驟而發生多種測定結果。以下是小李為大家提供整理的elisa試劑zui新實驗準備要點,僅供大家參考,希望幫大家解決檢測上的疑問!


試劑的準備
按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。

加樣
在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結合物,加底物。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產生氣泡。 加標本一般用微量加樣器,按規定的量加入板孔中。每次加標本應geng換吸嘴,以免發生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。


保溫
在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后??乖固宸從Φ耐瓿尚枰幸歡ǖ奈露群褪奔?,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當。ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會,只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。


洗滌:
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來??梢運翟贓LISA操作中,洗滌是zui主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種


顯色和比色
(1) 顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應,此時酶催化無色的底物生成有色的產物。

(2) 比色
比色前應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中。


ELISA kit用途:科研實驗等領域科學研究,不得用于臨床診斷
ELISA kit應用:被測樣品的定性定量分析
ELISA試劑盒庫存:現貨供應、廠家低價直銷